低音提琴定弦方法复杂。目前通用的是四弦四度定弦：从高到低为G、D、A、E。在这样的定弦中，低音提琴能演奏的最低音为Kontra E。为了求得最低音与大提琴的八度关系，欧美的交响乐队都力争至少将低音提琴的最低音扩展至Kontra C。
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